實時熒光PCR的技術(shù)種類
更新時間：2024-01-29 點(diǎn)擊次數(shù)：2107
實時熒光定量PCR儀可用于牧場、林場、養(yǎng)殖場以及水源等地進(jìn)行實時檢測，對災(zāi)情、疫情防控的快速診斷，食品安全領(lǐng)域的檢驗檢疫。強(qiáng)大的軟件分析功能，可以進(jìn)行定量分析，熔解曲線分析，基因分型，相對定量等；采用LED光源設(shè)計，節(jié)能環(huán)保，使用壽命長，免維護(hù)；四通道雙模塊設(shè)計，自由搭配實驗，可以實現(xiàn)2個不同的程序獨(dú)立運(yùn)行。
1.雙雜交探針：就是在兩條寡核苷酸雜交探針上分別標(biāo)記熒光供體基團(tuán)和熒光受體基團(tuán)，兩基團(tuán)的激發(fā)光光譜有一定程度的重疊。對兩條探針的要求是，其與靶核酸的雜交位置應(yīng)相互鄰近。當(dāng)兩條探針與靶基因同時雜交時，兩個熒光基團(tuán)靠得很近，其間的距離在1~10 nm(通常為1~5個堿基)，依據(jù)FRET原理，在供體基團(tuán)一定波長的激發(fā)光作用下，發(fā)生能量傳遞，從而激發(fā)受體基團(tuán)發(fā)射另一種熒光，熒光強(qiáng)度和PCR反應(yīng)中DNA合成量成正比。
2.染料法：SYBR Green I是一種比較常見的熒光染料，可以非特異的結(jié)合雙鏈DNA小溝，它可以嵌合進(jìn)DNA雙鏈，但不結(jié)合單鏈。當(dāng)SYBR Green I在溶液面未結(jié)合雙鏈DNA時，僅產(chǎn)生很少的熒光，當(dāng)它結(jié)合雙鏈DNA時，就發(fā)射出很強(qiáng)的熒光信號。
3.TaqMan探針：TaqMan探針是一個與模板特異性結(jié)合的熒光探針，它的 5'端標(biāo)記有熒光報告基團(tuán)(Reporter, R)，3'端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)(Quencher, Q)。當(dāng)探針完整的時候，熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)距離很近，使得熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光被淬滅。
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